为什么会存在荧光补偿?如何调节?

   |    2015年11月13日  |   文章  |    0 条评论  |    3828

转自【流式中文网】

流式细胞术的优点是同时可以进行多参数检测,从4色到20多色,快速并且信息量大,然而,不同荧光之间,可能存在的补偿,给很多新手造成了极大的困扰。


荧光之间为什么会存在补偿?

以FITC和PE为例,下图中显示的是两者的发射光谱,很明显,两者之间存在很大的重叠,这就意味着FITC发出的光,可能被PE检测器检测到,反之,PE发出的光,也能被FITC检测器检测到:




为了调节补偿,我们需要分别借助FITC单染标本,从PE检测信号中减掉漏过去的FITC荧光,借助PE单染标本,从FITC检测信号中减掉漏过去的PE荧光,最后形成如下图所示的样子,分别使Q1和Q3的MFI相等、使Q4和Q3的MFI相等:





但在实际使用过程中,我们要求尽量接近,不一定要使他们的MFI完全一致。
下面是三幅Diva软件中补偿调节的结果图片,a图代表的是正确补偿,b图代表的是过度补偿,c图代表的是补偿未调节到位,大家可以观察一下绿色和红色框内的数字,体会一下正确进行补偿调节的真谛。

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